详细介绍
在试验室里,我和师妹是公认的「惹祸搭子」,一同毛手毛脚、一同算错配比、一同污染细胞房……一同挨骂。这次我俩又一同研讨起了神经干细胞的课题,凡是有师妹在,我一点都不惧怕被卷到
一开端我俩都在起跑线跌倒,养个细胞也磕磕绊绊,但紧接着剧情脱离掌控,当我还在为细胞存活率低而烦恼时,小师妹已能自若的操控干细胞分解方向了?!这根本不像一个「工龄」只要一年的细胞培育小白,而是有多年经历的「老师傅」!
接连蹲了小师妹一周,总算让我发现了她逆袭的秘密武器——神经细胞培育攻略,每次试验前她都要翻几遍!手册我也讨来了,谁看完都得说一声「真香」~
除多种神经细胞的培育计划外,手册还包含神经元、神经胶质细胞标志物的完好罗列,神经炎症的剖析战略等。
在神经干细胞的研讨中,会遇到许多细节问题,在 Bio-Techne 的手册中都可以找到相应的回答,来看看师妹在小鼠皮层干细胞培育中遇到的这些费事,都是怎样处理的~
问题 1:在测验离心细胞以去除上清液偏重悬时,发现细胞团块不易打散,导致细胞计数不精确。
有用离心和重悬细胞同样是需求技巧的。必定要依据试验需求运用恰当的离心速度和时刻。如复苏冻存的细胞时,离心速度为 200 g,离心时刻 5 分钟;细胞传代时,离心速度为 100 g,离心时刻 5 分钟。离心后,应悄悄敲打离心管使细胞团块松懈,然后参加适量的培育基悄悄吹打,使细胞均匀涣散。
● 悄悄吹打:运用无菌的吸管或枪头重复悄悄吹打培育皿外表,协助细胞别离。
问题 2:神经干细胞的别离培育现已走上正轨,可是培育基替换和养分因子增加的频率怎样组织呢?
每天向培育基中增加新鲜的 EGF 和 FGF 储藏液,以坚持细胞生长所需的生长因子水平;每隔四天依据神经球的数量彻底替换一次新鲜的培育基,以保持适合的养分的东西和废物铲除。
● 无菌操作:在增加任何养分因子或替换培育基时,都应在无菌条件下进行,以防止污染。
● 温度调理:保证一切增加的培育基或储藏液都已预热至 37 ℃,以模仿细胞的体内环境。
● 调查细胞状况:在替换培育基或补加养分因子前,应查看细胞的形状和密度,以确认是不是需求调整补加频率或培育基替换周期。
依据手册中的具体过程:1)5~7 天后,搬运漂浮的神经球并离心,去除上清液。2)向部分解离的神经球中参加含有丝分裂原的预热的彻底 NSC 基础培育基,重悬细胞并进行细胞计数。3)将神经球悬液参加到含 20 ng/mL EGF 和 20 ng/mL bFGF 的新鲜、预热的彻底 NSC 基础培育基中进行培育(依据试验需求调整细胞密度)。
手册中除了具体的实操办法,还包含了常用的神经干细胞培育、分解及扩增、表型/功用检测的重组蛋白、抗体、小分子化合物、培育基增加剂等等,带你一同弯道超车!
《神经生物学研讨产品手册》包含了脊髓运动神经元、背根神经节神经元、皮层神经元、海马神经元、小胶质细胞、神经干细胞等神经细胞的培育计划,还包含神经元、神经胶质细胞标志物的完好罗列,神经炎症的剖析战略……点击下方图片,即可免费获取~
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